Mouse Tissue Direct PCR Kit  
目录号 
TQ212                                                                                                                                   
 

产品组成

组分	规格
2×Mouse Tissue Direct PCR Mix	5×1.0 mL
Lysis Buffer	2×20 mL
Proteinase K	800 μL

 
保存条件
Lysis Buffer 2~8℃、其余组分-20℃保存 24 个月。
 

产品简介

本产品是一款专为小鼠基因型快速鉴定设计的试剂盒，包含 DNA 粗提取及 PCR 扩增体系。本产品可直接利用小鼠尾巴、耳朵、脚趾等组织经 Lysis Buffer、Proteinase k 简单裂解处理后进行 PCR 扩增，无需过夜消化、酚氯仿抽提或柱式纯化等操作，使用简便，极大缩短实验耗时。产品适用于 2 kb 以内目的片段的扩增以及 3 对引物以内的多重 PCR 反应。
本产品所提供的 2×Mouse Tissue Direct PCR Mix 中，包含经过基因工程改造的 DNA 聚合酶、 Mg²⁺、dNTPs 及优化的缓冲体系，具有极高的扩增效率和抑制物耐受度，使用时只需加入模板和引物，并补水至 1×即可进行 PCR 反应，使用本产品扩增的 PCR 产物 3’端带有一个突出的"A"碱基，
纯化后可直接用于 TA 克隆（目录号：TC601）。
 

产品特点

²  操作简便：无需提取基因组 DNA；
²  适用广泛：适用于多种小鼠组织的直接扩增。
 
适用范围
本产品适用于小鼠基因敲除分析、转基因检测、基因分型等。
 

注意事项

1.      为了避免样品间出现交叉污染，需准备多个取样工具，如需反复使用可在每次取样后用 2%次氯酸钠溶液或核酸清洁剂（目录号：ND709 )对工具表面进行清洁；
2.      建议使用新鲜采取的小鼠组织，取样量不宜过大，以避免影响扩增结果；
3.      Lysis Buffer 的保存条件为 2~8℃，若低温保存可能会出现沉淀，在使用前务必充分溶解；
4.      PCR Mix 应避免反复冻融，短期内多次使用可置于 4℃保存。
 

使用方法

操作示例

1. 基因组 DNA 的释放

1)     裂解液配制
根据需要裂解的小鼠样品数量配制组织裂解液（组织裂解液应现用现配，且充分混匀后使用），单个样品所需试剂比例如下：

组分	体积
Proteinase K	4 μL
Lysis Buffer	200 μL

2)     样品准备与裂解推荐组织使用量：

组织类型	小鼠尾尖	小鼠耳朵	小鼠脚趾
推荐用量	1~3 mm	2~5 mm2	1~2 个

取适量小鼠组织样品于干净的离心管中，向每个离心管中加入 200 μL 新鲜的组织裂解液，涡旋震荡后在
55℃下孵育 30 min，然后 98℃加热处理 3 min。
3)     离心
将裂解产物充分震荡混匀，12,000 rpm 离心 5 min，上清液可作为模板直接用于 PCR 扩增。模板如需保存，可将上清液转移至另一个无菌离心管中，并置于-20℃保存，保存时间为 2 周。

2. PCR 扩增

将 2×Mouse Tissue Direct PCR Mix从-20℃取出后置于冰上解冻，上下颠倒混匀后按下表配制PCR 反应体系（冰上操作）：
 
 
 

组分	25 μL 体系	50 μL 体系	终浓度
2×Mouse Tissue Direct PCR Mix	12.5 μL	25 μL	1×
Primer 1 (10 μM)	1.0 μL	2.0 μL	0.4 μM
Primer 2 (10 μM)	1.0 μL	2.0 μL	0.4 μM
裂解产物*	As require	As require
ddH2O	Up to 25 μL	Up to 50 μL

*加入量不应超过体系的 1/10，加入量过高时，可能会抑制 PCR 扩增。

建议的 PCR 条件

步骤	温度	时间	循环数
预变性	94℃	5 min	1
变性	94℃	30 s	35~40 cycles
退火*	Tm+3~5℃	30 s
延伸	72℃	30 s/kb
终延伸	72℃	5 min	1
-	4℃	Hold	-

*退火温度：参考引物 Tm 值，建议退火温度设置为引物中 Tm 较小值+3~5℃；
 

常见问题与解决办法

Q1：无目的条带？ A1：

1)     裂解产物过量。选择最合适的模板用量，一般不超过体系的 1/10；
2)     取样量过大。将裂解产物稀释 10 倍后扩增，或减少取样量重新裂解；
3)     组织样品不新鲜。建议使用新鲜的组织样品；
4)     引物质量差。使用基因组 DNA 进行扩增验证引物质量，优化引物设计。
 

Q2：出现非特异扩增？ A2：

1)     退火温度过低、循环数过高。提高退火温度，减少循环数；
2)     模板浓度太高。减少模板用量或将模板稀释 10 倍后扩增；
引物特异性差。优化引物设计。